FITC荧光标记多肽合成-氨基己酸(ahx/acp)的引入

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FITC荧光标记多肽属于FRET肽(Fluorescence resonance energy transfer, FRET)其中一种。FRET肽是研究肽酶特异性的便利工具，其反应过程容易连续监测，为酶活性的检测提供了一个便捷的方法。FRET肽生物学应用于:
1 对新的蛋白水解酶的筛选和检测。
2 肽酶、蛋白酶、激酶、磷酸酶的动力特征和功能特征。
3 对多肽折叠的构象研究。
FITC荧光标记应用广泛，为黄色结晶，最大吸收光波长为490～495nm,最大发射光波长520～530nm，可呈现明亮的黄绿色荧光。FITC分子中含有异硫氰基与羧基荧光素相比更具活性，在碱性(pH9.0～9.5)条件下能与肽类或者蛋白的自由氨基结合，形成FITC-多肽/蛋白结合物，从而制成荧光多肽/蛋白。
在固相多肽合成过程中，FITC可以与含有侧链氨基的赖氨酸（Lys）、鸟氨酸（ornithine），或合成过程中的多肽N端氨基反应。当在N端标记时，建议在最后一个氨基和FITC与氨基反应产生的硫脲键之间引入烷基间隔器（alkyl spacer），如氨基己酸（Ahx/Acp）。多肽两种固相多肽合成方法(Fmoc和Boc策略合成法)最终脱离树脂程序，都要用到强酸TFA乃至更强的HF酸。如不引入氨基己酸（Ahx/Acp），氨基硫甲酰结构在强酸TFA中，极易进攻N末端首个氨基酸的酰胺键，形成五元杂环(乙内酰硫脲衍生物)，从多肽或者蛋白上脱落。在TFA/H2O体系中乙内酰硫脲衍生物进一步形成结构稳定的乙内酰硫氨基酸。从而连同最后一个氨基酸从多肽或者蛋白上脱落。引入氨基己酸，可以有效的保护FITC荧光标记多肽的稳定性，从而保证后续试验的有效性。

2016-04-19